Effect of Selected Flavonoids on L-Type Ca2+ Channels Expressed in Frog (Bufo Viridis) Oocytes Using Two Electrode Voltage Clamp Technique - الصائغ، نور ناظم سعيد; البدور، سلوى محمد; العبدالله، شتيوي صالح (عمان, 2015)
الخلفية والأهداف: تعد الأغذية الغنية بالفلافونويدات وثيقة الصلة بانخفاض نسبة الإصابة بأمراض القلب بسبب نشاطها المضاد للأكسدة وخصائصها المؤثرة في الأوعية الدموية، حيث وجد أن غالبية الفلافونويدات لها تأثيرات مرخية للأوعية الدموية تعزى إلى العديد من الآليات التي لم يكتمل فهمها بعد، وإحدى هذه الآليات هي تنشيط قنوات الكالسيوم طويلة الأمد الموجودة في الأوعية الدموية. تتلخص أهداف الدراسة بتحضير بيوض أعيد تشكيل تركيبها الجيني، مأخوذة من الضفادع المحلية Bufo viridis والمعبرة عن قنوات الكالسيوم القلبية الخاصة بالإنسان والمستجيبة لتغير الفولتية، للمرة الأولى في مختبراتنا، وذلك لاختبار التأثيرات المحتملة لكل من الفلافونويدات كويرستين وكريسن ومورين والفلافانون ثلاثي الهيدروكسيل على تيار الكالسيوم المتولد في البويضات. الطرق: بغية تحقيق أهداف الدراسة، تم إدخال الحامض النووي cDNA الذي يحمل الشيفرة الخاصة بالوحدة ألفا من قناة الكالسيوم المسؤولة عن تكوين ممر أيونات الكالسيوم خلال القناة، إلى البلازميد الناقل pSP64TS الذي استخدم في عمليات الاستنساخ خارج الخلية والترجمة داخل الخلية. لهذا الغرض، تم حقن ما يقارب 75 نانو ليترا من محلول الحامض النووي المراسل (mRNA) المحضر خارج الخلية والذي يحتوي على ما يقارب 50 نانو غراما من mRNA لكي يتم تصنيع بروتين القناة وغرسه داخل الغشاء السايتوبلازمي للبويضة. وقد استخدمت تقنية ربط الفولتية ثنائية الأقطاب لدراسة تأثير التراكيز 1 و10 مايكرومول/ ليتر لكل من الفلافونويدات سالفة الذكر والمذيب المستخدم لكل منها بالإضافة لتأثير منشط قنوات الكالسيوم Bay K8644 على عمل القنوات المعبر عنها في بيوض الضفدع. هذه التأثيرات درست من خلال 10 خطوات لإزالة استقطاب الغشاء السايتوبلازمي إبتداءا من الفولتية المعلقة -80 مللي فولت وصولا إلى +20 مللي فولت، وتم تسجيل وتحليل التيار المتولد في كل خطوة. النتائج: تشير نتائج الدراسة الحالية إلى حدوث التعبير عن الوحدة ألفا في خلايا بيوض الضفدع المحلي Bufo viridis واستجابتها لخطوات إزالة الاستقطاب المتدرج المتزايدة. فقد أظهر تركيز 10 مايكرومول/ ليتر من منشط قناة الكالسيوم Bay K8644 زيادة في تيارات الكالسيوم المتولدة مقارنة مع التركيز نفسه من الفلافونويدات الأربعة المستخدمة في البحث. هذا وقد أظهر تركيز 10 مايكرومول/ ليتر لكل من كويرستين ومورين والفلافانون ثلاثي الهيدروكسيل زيادة في تيار الكالسيوم بالمقارنة مع المذيب. وفي ما يخص التركيز 1 مايكرومول/ ليتر لكل من كويرستين ومورين فإنهما لم يظهرا أي تأثير على التيار بالمقارنة مع المذيب لكل منهما، ولكنهما أظهرا زيادة في التيار مقارنة بالتيار المتولد من البيوض المحقونة بالحامض النووي mRNA وتلك التي لم يتم حقنها. هذا وقد زاد كل من الفلافانون ثلاثي الهيدروكسيل (10 ميكرومول) وكريسن (1 ميكرومول) مقدار تيارات الكالسيوم بالدرجة نفسها. الاستنتاجات: إن بيوض الضفدع من نوع Bufo viridis تعد نظاما حيويا فعالا للتعبير عن قنوات الكالسيوم القلبية الخاصة بالإنسان ولاختبار تأثير الفلافونويدات المذكورة أعلاه على التيارات المتولدة في هذه البيوض نتيجة لتأثير ربط الفولتية وإزالة الاستقطاب المتدرج. أظهر كل من الفلافونويدات المدروسة تأثيرا محفزا على تيار الكالسيوم المتولد أثناء إزالة الاستقطاب المتدرج. وقد فسرت التشابهات والاختلافات في استجابة تيار الكالسيوم للفلافونويدات على أساس الاختلاف في التركيب الكيميائي لكل منها، فهي مرتبطة بعدد مجاميع الهيدروكسيل المرتبطة بهيكل جزيء الفلافونويد وعلى الرابطة المزدوجة بين ذرتي الكربون 2 و3 في الحلقة C.
Keywords: مضادات الأكسدة -- أمراض القلب -- الفلافونويدات -- تقنية ربط الفولتية