| المستخلص: |
عرف العديد من الأنواع المختلفة من البكتيريا تسبب مرض العفن الطري على البطاطا. في هذه الدراسة تم استخدام عدة طرق للكشف عن المسبب المرضي للعفن الطري على البطاطا. دلت نتائج الدراسة الميدانية أن مرض العفن الطري على البطاطا منتشر في مختلف مناطق زراعة البطاطا في الأردن. تم تجميع 204 عينة من نباتات البطاطا المصابة بمرض العفن الطري من مختلف مناطق زراعة البطاطا في الأردن والتي شملت: الرمثا، عمان، وادي الأردن، معان والمفرق وفي مختلف المواسم الزراعية حيث تم عزل وتعريف 131 عزلة من البكتيريا Pectobacterium carotovorum subspecies carotovorum (Pcc) تم عزلها وتعريفها باستخدام الفحوص الفسيولوجية والبيوكيميائية المختلفة وقد توافقت نتائج الفحوصات التي تمت على هذه العزلات مع نتائج الفحوص التي تمت على العزلة المرجعية (NCPPB 312). استخدم تفاعل البلمرة المتسلسل بعد عملية استخلاص الحامض النووي الرايبوزي منقوص الأكسجين للعزلات التي تم تعريفها وذلك باستخدام العديد من البادئات المتخصصة في الكشف عن الحمض النووي الرايبوزي منقوص الأكسجين لبكتيريا العفن الطري Pcc حيث تم استخدام كل من البادئات التالية: (Fd1/Rd1, ExpccF/R, recAF/R and pmrAF/R) ومن ثم تمت عملية الاستنساخ النووي تلتها عملية تحديد التتابع النووي. بعد تحليل نتائج التتابع النووي وعمل شجرة النشوء التطوري لعزلات Pcc الأردنية تبين وجود تشابه في ما بينها وبين تلك السلالات المتواجدة في البنك الوراثي مما يؤكد أنها تخص ذات البكتيريا Pcc حيث تم التوصل إلى وجود تشابه بين مختلف عزلات Pcc الأردنية من مختلف المناطق فيما بينها باختلاف نوع البادئات التي تم استخدامها مما يدل على أن التباين الوراثي لبكتيريا العفن الطري المتسبب عن Pcc قليل. من خلال تحليل نتائج التتابع النووي لمختلف العزلات تم التعرف على العديد من المسببات المرضية المرافقة لمرض العفن الطري بالإضافة إلى المسبب Pcc حيث تم التعرف على وجود كل من البكتيريا الممرضة التالية: Pseudomonas fluorescence, Enterobacteriaceae وأجناس من عائلة Enterobacter spp., Serratia spp., and Klebsiella spp. تم تصميم بادئات متخصصة للكشف عن عزلات Pcc الأردنية من خلال إجراء عملية التحالفات للقطع المتشابه لمختلف العزلات الأردنية والتي تم تكثيرها باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل باستخدام بادئات recA و pmrA ومن ثم تم فحص قدرة هذه البادئات المصممة من خلال إجراء فحوص النوعية وفحص الحساسية لمنتج تفاعل البلمرة المتسلسل. وقد بينت نتائج الفحوص تكون الحزم المتوقعة حيث بلغت 480 و 318 وحدة نووية للبادئتين على التوالي ولم يتم تكون حزم عند الكشف عن أجناس بكتيريا لا تنتمي لنفس الجنس وبلغت حساسية هذه البادئات بقدرتها عن كشف الحمض النووي منقوص الأكسجين بتركيز يساوي 1.0 بيجاجرام/ميكروليتر. بينت هذه الدراسة أن استخدام الفحوص الجزيئية مثل التكثير باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل كان دقيقا وحساسا في الكشف عن بكتيريا Pcc المسببة للعفن الطري على البطاطا. تعد هذه الدراسة هي الأولى من نوعها والتي تم من خلالها الكشف عن وتعريف البكتيريا Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum من خلال تفاعل البلمرة المتسلسل وعمليات تحديد التتابع والتسلسل النووي في الأردن.
|
