العنوان بلغة أخرى: |
طريقة مختبرية بسيطة وسريعة لرصد تواجد سلالات بكتيريا اللاكتوبسلس lactobacillus spp. في محتوى أجزاء أمعاء الدجاج الأحم باستخدام تقنية تفاعلات البلمرة المتسلسلة Pcr |
---|---|
المصدر: | مجلة الخليج العربي للبحوث العلمية |
الناشر: | جامعة الخليج العربي |
المؤلف الرئيسي: | صيدافي، علي رضا (مؤلف) |
مؤلفين آخرين: | صادقي، علي أصغر (م. مشارك) , مير حسيني، سيد ضياء الدين (م. مشارك) , شيوازاد، حسين (م. مشارك) , غاماني، محمد (م. مشارك) |
المجلد/العدد: | مج 25, ع 4 |
محكمة: | نعم |
الدولة: |
البحرين |
التاريخ الميلادي: |
2007
|
الشهر: | ديسمبر |
الصفحات: | 162 - 170 |
ISSN: |
1985-9899 |
رقم MD: | 504306 |
نوع المحتوى: | بحوث ومقالات |
قواعد المعلومات: | science, EduSearch |
مواضيع: | |
رابط المحتوى: |
الناشر لهذه المادة لم يسمح بإتاحتها. |
المستخلص: |
إن الميكروبات الدقيقة التي تستوطن الجهاز الهضمي معروفة بتأثيرها على الحالة الصحية والأداء العام وهي من أنواع الميكروبات الدقيقة التي تستوطن Lactobacillus spp. للدجاج. إن وجود سلالات من بكتيريا اللاكتوبسلس أمعاء الدجاج ومن الممكن أن تمنع تكون نوع من النسيج المرضي المبطن لأمعاء الدجاج والذي يعرف باسم الظهارة المعوية الناشئ بسبب الغزو المرضي لأنواع أخرى من البكتيريا المرضية، وقد تم تسجيل هذا التأثير لبكتيريا اللاكتوبسلس وما يترتب عليه من تحسين الحالة الصحية والأداء العام للدجاج. هذا وقد تم تحليل ورصد طبيعة هذا النوع من الميكروبات الدقيقة بواسطة استخدام طريقة الزراعة البكتيريولوجية، إلا أن هناك بعض المآخذ على استخدامات المزارع البكتيريولوجية لهذا الغرض، منها انخفاض حساسية هذه الطرق بحيث تتعذر الزراعة لبعض الأنواع من الميكروبات، وعدم القدرة على رصد أنواع الميكروبات غير القابلة للزراعة المختبرية والأنواع غير المعروفة من البكتيريا، واستهلاك هذه الطرق لقدر كبير من الوقت، وانخفاض مستويات التكاثر لبعض الميكروبات الدقيقة. هدفت الدراسة إلى تطوير طريقة مختبرية معتمدة على التقنية الجزيئية تسمح بالرصد السريع لسلالات بكتيريا اللاكتوبسلس في أجزاء الأمعاء وفي أعمار مختلفة من الدجاج، وقد تم استخدام 36 فرخة من النوع التجاري حيث تم رعاية هذه الأفراخ، ثم تم التضحية بمثانية أفراخ بشكل عشوائي وعلى التوالي على ثلاث مراحل عند بلوغ الأفراخ الأعمار 4، 14، و30 يوماً، وذلك لإخضاعها للتجربة، حيث تم استخلاص محتوى أجزاء الأمعاء الخاصة بها (الإثنا عشر، الجزء المتوسط من الأمعاء الدقيقة، الجزء الأخير من الأمعاء الدقيقة، والمصران الأعور)، واستخلص حمض DNA منها، وقد تم الرصد المحدد لسلالات بكتيريا اللاكتوبسلس باستخدام تقنية تفاعلات البلمرة المتعددة (PCR) بمضاعفة الجين 16SrRNA باستخدام النيكليوتيد المتعدد البادئة oligonucleotide primers. LAA-f وLAA-r، حيث نتج عنها ناتج حجمه 286bp. أظهرت النتائج وجود سلالات بكتيريا اللاكتوبسلس بصورة طبيعية وذلك في 77 عينة على مستوى جميع أجزاء الأمعاء باستخدام تقنية PCR. وقد شكلت هذه النتيجة ظهوراً بنسبة 80.21%، وبالإضافة إلى ذلك فإن نسب 65.52%، 90.62%، و84.37% من العينات كانت إيجابية أيضاً بالنسبة لظهور بكتيريا اللاكتوبسلس بصورة طبيعية باستخدام تقنية PCR عند الأعمار 14.4، و30 يوماً، على التوالي. كما أظهرت الدراسة بأن الأجزاء الأمامية للأمعاء قد سجلت مستويات أعلى في ظهور سلالات بكتيريا اللاكتوبسلس مقارنة بالأجزاء الخلفية. إن الطريقة التي قدمتها الدراسة قد طورت لهدف الرصد الروتيني، الدقيق والسريع لعدد كبير من العينات على أساس يومي. The gastrointestinal micro flora is known to affect the health and performance of broilers. Prevention of the intestinal epithelium from pathogenic bacteria invasion by Lactobacillus spp. strains and performance improvement of broilers has been reported. This micro flora has been analyzed by the use of bacteriological culture methods. These approaches have problems such as low sensitivities, inability to detect non- cultivatable bacteria and unknown species, time-consuming aspects, and low levels of reproducibility. The goal of this study was to develop a molecular method allowing rapid detection of the Lactobacillus spp. strains at gastrointestinal segments and different ages. Thirty six Commercial broilers were raised and at the ages 4, 14 and 30 days, eight birds were randomly sacrificed. Contents of duodenum, jejunum, ileum and cecum were prepared and their DNA extracted. The specific detection of the Lactobacillus spp. were based on PCR amplification of the 16S rRNA gene using oligonucleotide primers LAA-f and LAA-r which PCR product size was 286 bp. For total intestine segments, a total of 77 samples were positive for naturally occurring Lactobacillus spp. by PCR method. This value represented an incidence of 80.21% with respect to the total gut samples. Furthermore, 65.62, 90.62 and 84.37% samples were positive for naturally occurring Lactobacillus spp. by PCR method at 4, 14 and 30 days respectively. Meanwhile anterior segments exhibited nearly higher levels of Lactobacillus spp. compared with the posterior segments. The method presented in this manuscript was developed for routine, careful and rapid detection of a large number of samples on a daily basis. |
---|---|
ISSN: |
1985-9899 |