المستخلص: |
يمثّل إنزيم البروتيز صنفَ من الإنزيماتِ التي تحتلُّ موقع محوري في التطبيقات الفسيولوجيةِ و التجاريةِ. يوجد إنزيم البروتيز في مصادر متنوعةِ مثل النباتاتِ، الحيوانات، والكائنات الحيّة المجهرية. تم تنقية انزيم البروتيز المستخلص من البكتيريا المحبة للحرارة من سلالة الباسيلس(Bacillus) HUTBS-71 و HUTBS-62 مِنْ ينابيع ماعين الحارةِ بواسطة Ammonium sulfate fractionation, Sephadex-G100 gel filtration, DEAE ion exchange chromatography.إنزيم البروتيز مِنْ سلالة البسيلس HUTBS-71 نُقّى 57 مرة بناتج 1.7 % ؛ وإنزيم البروتيز مِنْ سلالة البسيلس HUTBS-62 نُقّى 53 مرة بناتج 2 %.وقد وجد أن إنزيم البروتيز المُنَقَّى متجانسَا بطريقة Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) . الوزن الجزيئي لإنزيم البروتيز المنقى من HUTBS-71 و HUTBS-62يتألف من وحدةِ واحدةِ 48-50 kDa بواسطة SDS-PAGE. نشاط الإنزيمَ تأثر بدرجة الحموضة ((pH ودرجة الحرارة، وقد لوحظ ان النشاط الأقصى للانزيم المستخلص من سلالة HUTBS-71 كان في درجة حموضة pH 7.8 ودرجة حرارة 65 ºم و ان النشاط الأقصى للانزيم المستخلص من سلالة HUTBS-71 كان في درجة حموضة pH 6.8 ودرجة حرارة80 ºم. كان انزيم البروتيز المستخلص من سلالة HUTBS-71 مستقرُّا بعد الإحتضانِ في 60 ºم و70 ºم لمدة 60 دقيقةِ واحتفظ ب 85 % و75 % من نشاطِه الأصليِ على التوالي. والإنزيم البروتينيHUTBS-62 من الناحية الأخرى، احتفظَ ب 80 % و60 % من نشاطِه الأصليِ على التوالي. قِيَم طاقةِ التنشيطِ (Ea) للإنزيمِ الصافيِ حُسِبَ مِنْ منحدر Arrenhenius وقد كانت 765 kJ mol-1 ل ( (HUTBS-71و587 kJ mol-1 ل (HUTBS-62).عمر النِصْفِ (t1/2) للإنزيمِ كَان 7 ساعاتِ في 80 ºم وساعتان في 90 ºم للإنزيم البروتيني المنقى مِنْ HUTBS-71 و HUTBS-62 على التوالي. نشاط إنزيم البروتيز HUTBS-71 قل بوجود EDTA ,CuSO4, FeCl3, CoCl2, NaCl CdCl2, ZnSO4, بينما وجود MnSO4, CaCl2 و NaClحَسّنَ النشاط بتركيز 5 mM. نشاط إنزيم البروتيز HUTBS-62 قل بوجود EDTA , CuSO4, CoCl2, CdCl2, ZnSO4 بينما وجود MnSO4, CaCl2, FeCl3 و NaClحَسّنَ النشاط بتركيز 5 mM .
|