ارسل ملاحظاتك

ارسل ملاحظاتك لنا







الرئيسية > Cloning and Expression of HMPR...>الوصف

Cloning and Expression of HMPREF0351-11084 Gene of Enterococcus Faecium into E. Coli Standard Strain

العنوان بلغة أخرى: كلونة وتعبير الجين HMPREF0351-11084 من بكتريا Enterococcus Faecium في سلالة قياسية من بكتريا E. Coli
المؤلف الرئيسي: المحنة، صديق غني جودة (مؤلف)
مؤلفين آخرين: المحنة، عباس شاكر (مشرف)
التاريخ الميلادي: 2017
موقع: الكوفة
التاريخ الهجري: 1438
الصفحات: 1 - 97
رقم MD: 1020400
نوع المحتوى: رسائل جامعية
اللغة: الإنجليزية
الدرجة العلمية: رسالة دكتوراه
الجامعة: جامعة الكوفة
الكلية: كلية العلوم
الدولة: العراق
قواعد المعلومات: Dissertations
مواضيع:
الجينات المشفرة | الأحماض الأمينية | تحسين قواعد الجين | إنتاج البروتين
رابط المحتوى:
صفحة العنوان     
المستخلص     
قائمة المحتويات     
24 صفحة الأولى     

الناشر لهذه المادة لم يسمح بإتاحتها.
صورة الغلاف QR قانون
حفظ في:
المستخلص: تم تصميم وإعادة تشكيل الجين HMPREF0351_11084 المشفر إلى بروتين العائلة A لقاح مستضد ذات الرئة (رقم هوية الجين هو GeneID: 12999770). من خلال عملية التصميم تم إضافة تسلسلات مطلوبة مثل مواقع قطع لإنزيمات التقييد وتسلسل مشفر إلى ستة أحماض أمينيه متعاقبة نوع هستادين (6XHis-tag) دون التأثير على تركيب البروتين، كما تم تحسين قواعد الجين لغرض إنتاج أفضل للبروتين. استخدمت في ذلك برامج المعلومات الحيوية (Bioinformatics software). تم تصنيع الجين ودمجه في ناقل الاستنساخ PGH، تم استنساخ جين HMPREF0351_11084 المصنع ودمجه في موقعي التقييد NcoI و EcoRI في ناقل التعبير pET28a تحت سيطرة المحفز T7 promoter. ناقل التعبير المؤتلف المكون من الناقل والجين المصنع تم تحويله في خلايا BL21 (DE3). تم التحري عن الخلايا المتحولة مع الناقل المؤتلف باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل للمستعمرة، تم التأكد من البلازميدات المرشحة (المستعمرات الموجبة) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل للبلازميد، الهضم بأنزيمات التقييد وتحديد تسلسل الحمض النووي DNA sequencing للجين الهدف. أكدت نتائج تلك الاختبارات وجود الجين الهدف ضمن بنية الناقل التعبيري. تم تنمية خلايا BL21 (DE3) الحاوية على ناقل التعبير pET28a وجينHMPREF0351_11084 في وسط Luria Bertani broth الحاوي على مضاد Kanamycin وتم استحثاث الخلايا بمادة IPTG للحصول على البروتين الهدف المؤتلف. البروتين الناتج من تعبير الخلايا البكترية المعبرة تم تحليله باستخدام الفصل الكهربائي للبروتينات على هلام متعدد الأكريلامايد تحت ظروف المسخ (SDS-PAGE) وتم تصبيغه باستخدام صبغة Coomassie brilliant blue. أظهر هلام متعدد الأكريلامايد المصبغ حزمة بروتين الهدف المتوقع وبوزن جزيئي هو 24.9 كيلو دالتون. استخدمت وصمة ويسترن Western blot لغرض التأكد من وجود البروتين الهدف. تم التحري عن حزمة بروتين HMPREF0351_11084 وقد لوحظت باستخدام نظام المضيء الكيميائي المحسن (Enhanced chemiluminescence) وتم تصوير حزمة البروتين المطلوبة بواسطة نظام KODAK image station 4000R system. الدراسة الحالية تصف ولأول مرة تعبير الجين HMPREF0351_11084 في محاولة لإنتاج نوع جديد محتمل من لقاح بروتيني للمكورات الرئوية. يتطلب هذا الموضوع إجراء المزيد من الدراسات بخصوص بروتين HMPREF0351_11084 وتقيم قابليته المناعية في استحثاث الأجسام المضادة التي توفر الحماية من إصابات المكورات الرئوية.

عناصر مشابهة


© 2024 المنظومة. جميع الحقوق محفوظة.